抗體的純化

低于血清、腹水和組織培養(yǎng)上清的澄清，離心和過(guò)濾是基本的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，這些技術(shù)可以去除會(huì)阻塞曾吸住的脂類和小顆粒物質(zhì)。對(duì)于某些樣品，緩沖液置換和除鹽也是必要的步驟。硫酸銨沉淀作為更進(jìn)一步的預(yù)處理步驟，經(jīng)常用于濃縮腹水中的免疫球蛋白。

一、抗血清

多克隆抗體有時(shí)不經(jīng)純化的，稱為血清和抗血清。抗血清是指已經(jīng)除去了凝血蛋白和血紅細(xì)胞的免疫宿主的血液。抗血清包含所有種類的抗體、免疫球蛋白以及其他血清蛋白。它所包含的不僅有識(shí)別靶抗原的抗體，還有識(shí)別非靶抗原的抗體，在免疫分析中有時(shí)會(huì)發(fā)生非特異性反應(yīng)。由于這個(gè)原因，粗制抗血清通常要進(jìn)行純化，以去除血清蛋白，增加能特異和靶抗原相結(jié)合的免疫球蛋白的比列。

二、組織培養(yǎng)上清

單克隆抗體可以通過(guò)雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)（細(xì)胞分泌性抗體）并收獲雜交瘤組織上的培養(yǎng)上清來(lái)獲得。

三、腹水

單克隆抗體可以通過(guò)在小鼠的腹腔中生長(zhǎng)雜交瘤細(xì)胞而產(chǎn)生。雜交瘤細(xì)胞注射入小鼠后，就會(huì)在小鼠腹腔繁殖并產(chǎn)生液體（腹水），這種腹水就包含了高濃度的可收獲抗體，比雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)有更高的抗體量。

四、抗體純化

多克隆抗血清或單克隆腹水、組織培養(yǎng)上清通常通過(guò)以下三種方法的一種來(lái)進(jìn)行純化。

1、蛋白A/G純化

蛋白A/G純化是應(yīng)用金黃色葡萄球菌的蛋白A或鏈球菌的蛋白G對(duì)免疫球蛋白Fc段的高親和性。蛋白A/G純化從粗制抗血清中去除了血清蛋白，但沒(méi)有去除非特異的免疫球蛋組分。結(jié)果蛋白A/G純化的抗血清仍然具有一小部分不期待的交叉反應(yīng)性。

2、親和純化

親和純化是通過(guò)相似性分離某一特定蛋白或具有相似特征的一組蛋白。這種分離蛋白的技術(shù)是基于在蛋白和耦合于層析介質(zhì)上的特定配基之間的一種可逆的相互作用。抗原親和純化是利用免疫球蛋白能夠特異性地同刺激它產(chǎn)生抗原進(jìn)行結(jié)合的特點(diǎn)，消除了大量的非特異免疫球蛋白成分，把與目標(biāo)抗原特異結(jié)合的免疫球蛋白富集。因此親和純化后獲得的主要是含目標(biāo)特異性免疫球蛋白。

3、前吸收

多克隆抗體有時(shí)要經(jīng)過(guò)前吸收，也就是說(shuō)它們要被不同物種來(lái)源的其它蛋白或血清吸收，以消除可能的交叉反應(yīng)的抗體。這樣純化后的抗體春都和特異性都很高，任何交叉反應(yīng)都被顯著減少。