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層析技術(shù)概念、原理、分類(凝膠層析和離子交換層析)

更新時間:2015-07-02      點擊次數(shù):8064

一、概念

利用混和物中各組分理化性質(zhì)(吸附力、分子形狀、大小、分子極性、分子親和力以及分配系數(shù))的差異,在物質(zhì)經(jīng)過兩相中進行分離的一種技術(shù)。

本世紀初(1903年),俄國植物學家M.C.Jber發(fā)現(xiàn)并使用這一技術(shù)證明了植物的葉子中不僅有葉綠素,還含有其他色素,實際上他使用的吸附層析?,F(xiàn)在層系法已成為生化、分子生物學及其它學科領域有效的分離、分析工具之一。

二、原理


具體過程:

可分離物質(zhì):糖類、有機酸、氨基酸、核苷酸。


三、分類

1.  按兩相所處物理狀態(tài)分類

氣相層析:氣液層析(固定相為液體)和氣固層析(固定相為固體),流動相為氣體。

液相層析:液液層析(固定相為液體)和液固層析(固定相為固體),流動相為液體。

2.  按層析方式分類

柱層析:固定相裝于柱內(nèi),使樣品沿著一個方向移動而分離。

薄層層析:將適當粘度的固定相均勻鋪在薄板上,點樣后,用流動相展開。

紙層析:用濾紙作液體的載體,點樣后用流動相展開。

3.  根據(jù)層析原理分類:常用分類法

(1)吸附層析:固定相是固體吸附劑,通過對不同溶質(zhì)吸附力強弱不同進行分離。

(2)分配層析:利用兩相中的分配系數(shù)不同。

分配系數(shù):當一種溶質(zhì)在兩種給定的互不相溶的溶劑中分配時,在一定溫度下達到平衡后,溶質(zhì)在兩相中的濃度比值為一常數(shù),即分配系數(shù)(Kd)

Kd=Ca / Cb

Ca和Cb分別代表某一物質(zhì)在互不相溶的兩相,A相(動相)和B相(靜相)中的濃度。

(3)離子交換層析:固定相是離子交換劑,各組分與其親和力不同

(4)凝膠層析:固定相是多孔凝膠,根據(jù)流動相中溶質(zhì)的分子量大小差異進行分離

(5)親和層析:利用固定相載體表面偶聯(lián)具有特殊親和作用的配基,與溶質(zhì)分子發(fā)生可逆的特異性結(jié)合進行分離

(6)金屬螯合層析

(7)疏水層析

(8)反相層析

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