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酸奶中乳酸菌的測定實驗

更新時間:2014-03-19      點擊次數:6694

活性酸奶需要控制各種乳酸菌的比例,乳酸菌對營養有復雜的要求,生長需要碳水化合物、氨基酸、肽類、脂肪酸、酯類、核酸衍生物、維生素和礦物質等。測定乳酸菌時必須盡量將試樣中所有活的乳酸菌檢測出來,采用稀釋平板菌落計數法檢測酸奶中的各種乳酸菌可獲得滿意的結果。本實驗宗旨是了解酸乳中乳酸菌分離原理及掌握酸乳中乳酸菌菌數的檢測方法。

實驗方法原理活性酸奶需要控制各種乳酸菌的比例,有些國家將乳酸菌的活菌數含量作為區分產品品種和質量的依據。由于乳酸菌對營養有復雜的要求,生長需要碳水化合物、氨基酸、肽類、脂肪酸、酯類、核酸衍生物、維生素和礦物質等,一般的肉湯培養基難以滿足其要求。測定乳酸菌時必須盡量將試樣中所有活的乳酸菌檢測出來。要提高檢出率,關鍵是選用特定良好的培養基。采用稀釋平板菌落計數法,檢測酸奶中的各種乳酸菌可獲得滿意的結果。
實驗步驟

一、樣品稀釋


先將酸奶樣品攪拌均勻,用無菌移液管吸取樣品25 ml加入盛有225 ml無菌水的三角瓶中,在旋渦均勻器上充分振搖,務必使樣品均勻分散,即為10:1的樣品稀釋液,然后根據對樣品含菌量的估計,將樣品稀釋至適當的稀釋度。


二、制平板


選用2~3個適合的稀釋度,培養皿貼上相應的標簽,分別吸取不同稀釋度的稀釋液1 ml置于平皿內,每個稀釋度作2個重復。然后用溶化冷卻至46 ℃左右的MRS或改良CHALMERS培養基倒平皿,迅速轉動平皿使之混合均勻,冷卻成平板。


三、培養和計數


將平皿倒置于40 ℃恒溫箱內培養24~48 h,觀察長出的細小菌落,計菌落數目,按常規方法選擇30~300個菌落平皿進行計算。

注意事項

1.  指示劑顯色

由于產酸菌落周圍能使CaCO3產生溶解圈,酸堿指示劑應呈酸性顯色反應。

2.  鏡檢形態

必要時,可挑取不同形態菌落制片鏡檢確定是乳桿菌或乳鏈球菌。保加利亞乳桿菌呈桿狀,成單桿、或雙桿菌或長絲狀。嗜熱鏈球菌,呈球狀,成對、或短鏈、或長鏈狀。

3.  參照比較

據介紹,改良CHALMERS培養基的檢出率較MRS培養基高,M17培養基較適合于乳球菌的培養,在檢測時可同時使用多個培養基作比較。

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